التوصيف الجزيئي للفايروسات المعوية المسببة لمرض الشلل الرخوي الحاد بالاطفال المعزولة مباشرة من عينات البراز من غير استخدام تقنية الزرع النسيجي

Print Friendly, PDF & Email

ا.م.د. حلا يونس فاضل/ جامعة بغداد – كلية العلوم – قسم علوم الحياة

الخلاصة

تعد الفيروسات المعوية  (NPEVs+ PV) بأنواعها الكثيرة والمختلفة المسبب الاكثر شيوعا لمرض الشلل الرخوي الحاد بين الاطفال في الوقت الحاضر. اذ تعتمد المؤسسات الصحية العراقية في الوقت الحالي في تشخيصها لهذه الفيروسات على اجراء فحص الزرع النسيجي (tissue culture) لعينات خروج, كمؤشر للكشف عن الاصابة الفيروسية. ولكن تتصف هذه الطريقة بعدم قابليتها في الكشف عن الحالات السالبة خطأً (false negative) وضعف قابلتيها في الكشف عن الحالات الموجبة ضعيفة النمو (weak positive) في المزرعة النسيجية. أضافة الى طول الفترة الزمنية والتكلفة المادية المتطلبة في فحص الزرع النسيجي وعدم امكانية توفر الخلايا على مدار السنة. من جهة اخرى, استخدام الطرائق المناعية في الدراسات البحثية السابقة لم تقدم تشخيص شامل ودقيق لكل الانماط المصلية لهذه العائلة, اضافة الى سهولة تأثرها بالطفرات الجينية الحاصلة في مادة الفيروس الوراثية (Ribonucleic acid). ولهذا هدفت الدراسة الحالية الى تحوير طريقة تشخيص الفايروسات المعوية من الزراعة النسيجية الى الطرق الجزيئية بعزل زلجزيئات الفيروسات المعوية مباشرة من عينات البراز دون الحاجة لزرعها ومضاعفتها في المزرعة النسيجية والتي عوضت عن تكثير الفايروس بطريقة الزرع النسيجي عن طريق تركيز المحتوى الفايروسي بالفلترة والحصول على الراشح المركز الحاوي على جزيئات الفايروس المعوي فقط (viral particles only)  والتي تؤدي الى استغلال المواد المتوفرة مختبريا في مختبر الصحة العامة المركزي لاستخلاص الحامض النووي  (RNA)من العالق الفايروسي (viral particle suspension) ومن ثم تشخيص جزيئات الفايروس باستخدام تفاعل سلسلة البلمرة-أنزيم عكس الاستنساخ(RT- PCR)  ببادئات متخصصة للمنطقة الغير مشفرة من الحمض النووي non coding region primers)). اضافة الى اجراء تحليل للتتابع النيوكليوتيدي (nucleotide sequence analysis) للحامض النووي الفيروسي لمجموعة الفايروسات المعوية غير فايروس شلل الاطفال (NPEVs) باستخدام بادئات متخصصة للجين المشفر لبروتين القشرة الرابع (viral protein gene 4- primers) لتحديد الانماط المصلية لبعض السلالات المهمة منها التي ترافقت مع حالات شلل دائم وحالات وفاة وتصنيفها بالشجرة الجينية مقارنة مع الدول العالمية وتوثيقها لأول مرة في المجتمع العراقي. جمعت عينات البراز من الاطفال المصابين وتم تصنيفها اعتمادا على طريقة استخلاص الحمض النووي الفيروسي (RNA extraction method)  الى مجموعتين الاولى مجموعة العالق الفايروسي (viral particle suspension) التي عزلت مباشرة من عينات البراز ومجموعة العالق الخلوي المستخلصة من العالق الخلوي (cell suspension) والتي تم تصنيفها اعتمادا على درجة تأثيره الفايروس المرضي في خلايا المزرعة النسيجية (cytopathic effect) الى مجموعة النمو القوي, مجموعة النمو الضعيف ومجموعة النتائج السالبة خطأ وذلك لغرض المقارنة بين كلتا الطريقتين. اظهرت نتائج الفحص الجزيئي لمجموعة العالق الفايروسي (viral particles suspension) بطريقة تفاعل سلسلة البلمرة-أنزيم عكس الاستنساخ تشخيص 100% لكل العينات الموجبة القوية والضعيفة النمو في المزرعة النسيجية  بسرعة ودقة وكفاءة عالية. من ناحية اخرى تم تشخيص نسبة 35% عينة موجبة من مجموعة العينات السالبة خطأً في الفحص النسيجي والتي اظهر بعضها حالات شلل دائم لدى الاطفال المصابين. وبذلك فقد تغلبت هذه التقنية على مشاكل الزراعة النسيجية من حيث الوقت, الجهد, التلوث والتكلفة المادية المتطلبة. كشفت نتائج فحص التسلسل النيوكليتيدي (nucleotide sequence analysis)  عن تسعة انماط  مكررة من اصل 17 نمط  جيني لجنس الفيروسات المعوية غير فايروس شلل الاطفال  (non polio Enterovirus) من نوع B والتي تتضمن النمط   Echoviruses الذي يضم (E- 4, E- 9, E- 14, E- 7, E- 20), النمط Coxsackie virus (Cox- B1)، والانماط المعوية الجديدة (New enteroviruses) والتي تظم (EV-B “unknown type”  EVB- 74  و .(EVB- 111  وثقت هذه الدراسة حالتي وفاة لهذه المجموعة من الفيروسات والتي توافقت مع النمطين الجينيين (Echovirus- 4 و EVB- 74)  اللذان تميزا بظهور العديد من الطفرات في حمضهما النووي عند مقارنتهما مع السلالات العالمية الاكثر تطابقا في بنك الجينات (NCBI). كذلك تم توثيق النمط الجيني (EVB- 111) الذي يعد من الانماط الفيروسية المعوية النادرة. وفي العينات السالبة خطأً, لوحظ تردد النمط الجيني (Echovirus- 20) و النمط الجيني (COX- B1) وهذا ما ينبئ عن خطورة هذه الفيروسات الكامنة والتي لا يكشف عنها الفحص الخلوي بشكل واضح ودقيق مقارنة مع الفحص الجزيئي  الذي ترافق مع العزل المباشر لجزيئات الفايروس.

 

Comments are disabled.