استخلاص الدنا من المكورات العنقودية باستخدام الغليان بالماء المقطر والتجميد المفاجئ

Print Friendly, PDF & Email

أ.م.د. مروى حميد مطشر/قسم علوم الحياة – كلية العلوم – جامعة بغداد

أ.د. مي طالب فليح عيسى/قسم علوم الحياة – كلية العلوم – جامعة بغداد

الخلاصة

تمتلك بكتريا المكورات العنقودية جدار بكتيري صلب يصعب تحطيمه بالغليان اوعدد الاستخلاص المصنعة الا باستخدام الانزيمات المكلفة (لايسوستافين ولايسوزايم وبروتينيزK) الهاضمة لجدارهذه البكتريا ولكونها المسبب الرئيس للتسممات الغذائية في العراق , لذا هدفت هذه الدراسة للحصول على طريقة سريعة وغير مكلفة لاستخلاص الحامض النووي الرايبوزي منقوص الاوكسجين (الدنا) من هذه البكتريا دون استخدام المواد الكيميائية المهيجة والعدد المصنعة المكلفة والتي تحتاج الى انزيمات اضافية مكلفة في حالة بكتريا المكورات العنقودية فقط؛ لكونها ذات جدار بكتيري صلب يختلف عن باقي الممرضات البكتيرية.

جمعت العينات الغذائية من الجبن والحليب من اسواق بغداد المحلية عشوائيا وتم عزل المكورات العنقودية منها بطرق الزرع التقليدية وبعد تشخيص العزلات البكتيرية بالطرق الكيموحيوية والمصلية على انها المكورات العنقودية الاتية : and, S.chromogenes, Staphylococcus aureus S.epidermidis   تم اجراء التجارب المختبرية للتوصل الى الظروف المثلى لاستخلاص الدنا من هذه البكتريا.

استخدم الماء المقطر الخالي من الانزيمات الحالة للأحماض النووية فقط في عملية الاستخلاص ولم يتم اعتماد اي عدة مصنعة او انزيم لاذابة الجدار الخلوي للمكورات العنقودية وانما تم اختبار متغيرات الحرارة والوقت اللازم لتكسير الجدار البكتيري, وبعد اتمام التجارب العلمية تم التوصل الى طريقة بسيطة وغير مكلفة تم فيها استخلاص الدنا باستخدام درجات الحرارة العالية بدرجة 85 مئوية لمدة 20 دقيقة ثم مباشرة يتم التجميد المفاجئ بحمام ثلجي لمدة 10 دقائق يتم تعريض المستخلص البكتيري الى النبذ المركزي لمدة خمس دقائق بواقع عشرة الاف دورة في الدقيقة وتم سحب الرائق بدقة وهو يمثل الاحماض النووية بعد ذلك تم التأكد من نقاوة ونوعية الدنا المستخلص ، وذلك باستخدام تقنيات الامتصاص الضوئي والترحيل الكهربائي (باستخدام هلام الاكاروز بتركيز 0,8 % وصبغة بروميد الاثيديوم وتيار 70 فولت لمدة ساعة) كما تم التأكد من فاعليته لاتمام التجارب الجزيئية وذلك لتكون الدراسة ذات اهمية اقتصادية مثلى للبلد اذ لا تتوفر اي طريقة لفحص السموم المعوية للمكورات العنقودية في الاغذية لذا فانه في هذه الدراسة تم التحري عن جين fem A المسؤول عن تشخيص المكورات العنقودية الذهبية وجين seb المسؤل عن انتاج السم المعوي العنقودي SEB باستخدام تقنية ال.PCR

تعد الطريقة التي توصلت اليها هذه الدراسة طريقة سريعة وتقلل الجهد والكلفة الاقتصادية للطرق التقليدية لاستخلاص الدنا من المكورات العنقودية ويمكن تطبيقها للتشخيص الجزيئي للمكورات العنقودية وسمومها المعوية في الاغذية المستوردة كما يمكن استخدام الدنا المستخلص بهذه الطريقة في جميع الPCR كدنا قالب للتفاعل.

 

Comments are disabled.