Last Updated on 05/01/2022
ا.م.د. حيدر زهير علي/ قسم علوم الحياة، كلية العلوم، جامعة بغداد
م.م. ضحى مهند عبد العباس/ قسم تقنيات المختبرات الطبية، كلية الاسراء الجامعة
الخلاصة
هدفت هذه الدراسة الى اعتماد تقنية جزيئية حديثة و هي PCR-RFLP و التي تتضمن تفاعل البلمرة المتسلسل Polymerase chain Reaction (PCR) متبوعا باختبار ﺘﺒﺎﻴن أطوال ﻗطﻊ اﻟﺘﻘﻴﻴد (RFLP) Restriction Fragment Length Polymorphismلتحديد جنس و نوع اللشمانيا الجلدية للعزلة العراقية بدقة على مستوى النوع. اذ من المعروف ان جنس اللشمانيا يتواجد بصورة متوطنة في العراق وبأربعة أنواع لجنس اللشمانيا، نوعين للشمانيا الجلدية L. tropica and L. major و نوعين للشمانيا الاحشائية L. donovani and L. infantum.
تم اجراء اختبار تفاعل البلمرة المتسلسل لعزلتين باستخدام بادئ متخصص لتضخيم منطقة ITS والتي تقع ضمن دنا اللشمانيا لغرض تشخيص الجنس وهو LITSR/L5.8S و اظهرت النتائج قدرة البادئ على تضخيم المنطقة وكان حجم القطعة bp 450~. بعدها تم تقطيع ناتج تفاعل البلمرة المتسلسل (PCR) لمنطقة ITS1 باستخدام الانزيم القاطع HaeIII و أظهرت نتائج الترحيل بعد التقطيع حزمتين واضحتين بحجمbp 150 وbp 300. النتائج المستحصلة تؤكد ان العزلتين تعود الى جنس اللشمانيا الجلدية و تحديدا اللشمانيا الاستوائية نوع Leishmania tropica لأنها و حسب بحوث عديدة سابقة اثبتت انها حاوية على منطقة واحدة يستطيع الانزيم العمل عليها (GG/CC) والتي تسمى restriction site . هذه الدراسة تعد الاولى في العراق والتي من خلالها تم التشخيص الجزيئي الدقيق لجنس ونوع اللشمانيا بخطوتين في المختبر و الحصول على نتائج خاصة بالعزلة العراقية فقط حيث اعتمدت على طريقة حديثة في التشخيص وتقليل الجهد بدلا من الطرق التقليدية غير الدقيقة والتي تعتمد على الاعراض السريرية والتي يمكن ان تتعارض مع تشخيص امراض جلدية أخرى فضلا عن اختصار الوقت والكلفة في الاختبارات الجزيئية الأخرى والتي تعتمد على عدد كبير من البوادئ (primers) لهدف الوصول الى الجنس ثم النوع.